激光共聚焦制作

    共聚焦顯微技術(shù)（Confocal microscopy）是通過(guò)激光掃描共聚焦顯微鏡來(lái)獲取細(xì)胞內(nèi)某個(gè)薄層面上的熒光信息, 并結(jié)合計(jì)算機(jī)自動(dòng)控制和信息收集功能，對(duì)熒光信號(hào)的分布、強(qiáng)度和動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行較好的的分析和整合, 從而得到豐富的細(xì)胞信息。

1.消除了聚焦平面以外的熒光信號(hào)的干擾, 故成像清晰

2.可以對(duì)樣品不同層面進(jìn)行連續(xù)逐層掃描, 再由計(jì)算機(jī)將這些圖形重組為三維圖像，圖形清晰度高、層次分明、立體感更強(qiáng)

3.可對(duì)細(xì)胞某個(gè)選定結(jié)構(gòu)進(jìn)行長(zhǎng)度和體積的測(cè)量, 在分析細(xì)胞空間結(jié)構(gòu)和某些物質(zhì)的胞內(nèi)定位方面具有明顯的優(yōu)勢(shì)

4.可同時(shí)實(shí)現(xiàn)多重指標(biāo)的檢測(cè)。目前，該技術(shù)應(yīng)用范圍已擴(kuò)展到細(xì)胞學(xué)、微生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、遺傳學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)、生理和病理學(xué)等學(xué)科，成為現(xiàn)代生物學(xué)微觀研究的重要工具

   激光共聚焦制作

使用前請(qǐng)注意：

1.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)前請(qǐng)了解儀器相關(guān)配置參數(shù)，選擇合適的抗體或熒光染料等。我校共聚焦顯微鏡激光器波長(zhǎng)分別為405nm、488nm、532nm、635nm。同時(shí)為了避免使用沖突，請(qǐng)?zhí)崆邦A(yù)約使用時(shí)間。

2.細(xì)胞樣品請(qǐng)用0.17mm的蓋玻片爬片或者用共聚焦培養(yǎng)皿培養(yǎng)，組織樣品后用0.17mm蓋玻片封片；封片劑可用緩沖甘油或防淬滅劑等，對(duì)于活細(xì)胞，則可使其浸潤(rùn)于相應(yīng)的溶液中，直接滴片和封片，立即觀察，不加上述封片劑。

3.為了獲得理想的圖像，組織切片或細(xì)胞標(biāo)本不能太厚及太密，并且應(yīng)避免細(xì)胞重疊或雜質(zhì)掩蓋。

4.為保持組織細(xì)胞的完整性和所要檢測(cè)物質(zhì)的抗原性，非活細(xì)胞觀察的樣品請(qǐng)盡量用固定劑固定樣品。

5.用前請(qǐng)用熒光顯微鏡確認(rèn)一下是否有熒光，條件摸索調(diào)整合適后再使用共聚焦顯微鏡。

使用時(shí)，注意以下幾點(diǎn)：

1.嚴(yán)格按照使用規(guī)程操作，不得改變操作程序，激光共聚焦顯微鏡系統(tǒng)中的激光器使用壽命有限且價(jià)格昂貴。所以，在操作過(guò)程中切記，在開(kāi)關(guān)的啟動(dòng)順序以及在掃描過(guò)程中努力做到快速有序，保護(hù)好激光器。

2.注意不要暴露在中等功率和高功率的激光輻射中，特別要注意不得注視激光束，甚至不要觀看樣品；不得在系統(tǒng)附近儲(chǔ)存或使用易燃易爆物的固體、液體或氣體；可以引燃的材料如布或紙張不得放入光路中。

3.掃描后的圖像儲(chǔ)存在計(jì)算機(jī)內(nèi)，可作進(jìn)一步處理。由于計(jì)算機(jī)的硬盤(pán)有限，應(yīng)及時(shí)儲(chǔ)存到用戶CD光盤(pán)上，為了防止病毒浸染，禁用U盤(pán)及移動(dòng)硬盤(pán)等。

使用后注意：

及時(shí)用無(wú)水乙醇將油鏡鏡頭擦干凈，物鏡鏡頭調(diào)至低點(diǎn)，將顯微鏡周圍及房間清理干凈，后填寫(xiě)使用記錄。